• header
  • header
  • header
  • header
  • header
  • header
  • header
  • header
  • header
ВЕТЕРИНАРНАЯ КЛИНИКА "АВЕРС"
круглосуточно
+7 (495) 989-7747
наши новости
Все новости

Клиническая апробация применения стволовых клеток в лечении животных больных остеоартрозом

18-12-2015

Протокол клинического исследования

Руководители:

Главный ветеринарный врач

ветеринарной клиники ООО «АВЕРС»

нейрохирург-травматолог

кандидат биологических наук

Селюгин М.А.

Директор по науке ООО «ЦВКМ»

врач-иммунолог

кандидат медицинских наук

Еремин И.И.

Ответственные исполнители:

Главный ветеринарный врач

ветеринарной клиники ООО «АВЕРС»

нейрохирург-травматолог

кандидат биологических наук

Селюгин М.А.

Ветеринарный врач

ортопед-травматолог

ветеринарной клиники ООО «АВЕРС»

Кириллов О.Ю.

Директор по науке ООО «ЦВКМ»

врач-иммунолог

кандидат медицинских наук

Еремин И.И.

2015г.

1. Название исследования.

Сравнительное исследование клинической эффективности применения аутологичных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани и стромально васкулярной фракции жировой ткани в лечении животных больных остеоартрозом.

2. Актуальность.

Остеоартроз — дегенеративное заболевание, характеризующееся поражением суставных хрящей, связочного аппарата сустава и синовиальной капсулы, а также околосуставных тканей. Это наиболее часто встречаемая патология суставов (более 80%). Патоморфологическая основа — прогрессирующая потеря суставного хряща и реактивные изменения синовиальной капсулы и суставных поверхностей костей.

Предрасполагающими факторами служат:

  • Травмы сустава (внутрисуставные переломы, вывихи, подвывихи).
  • Структурные дефекты, связанные с генетически обусловленными заболеваниями (болезнь Легга-Кальве-Пертеса, дисплазия тазобедренного и локтевого суставов).
  • Ожирение, нарушение минерального обмена веществ.
  • Артриты, инфекционные заболевания.
  • Послеоперационные состояния.

У пациентов, как правило, отмечаются хромота, боль в области сустава, дистрофия мышц пораженной конечности, крепитация в суставе при движении, нарушение конфигурации конечности в области пораженного сустава. С течением жизни такие симптомы часто прогрессируют, что может приводить к неспособности пациента передвигаться. Такое состояние значительно нарушает качество жизни животного.

Как правило, лечение таких пациентов является симптоматическим и сопряжено с использованием нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВС) - часто длительного действия, что может привести к ряду осложнений, в основном, со стороны желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), почек, печени. Противопоказаниями к приему НПВС служат заболевания желудочно-кишечного тракта, выраженные почечная и печеночная недостаточность. При этом, часто такое лечение приводит только к временному улучшению, а, порой, положительный эффект вовсе отсутствует.

Применение аутологичных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток должно приводить к регенерации тканей пораженного сустава и улучшение кровоснабжения пораженных участков и, как следствие, выступать в качестве патогенетической терапии. Что должно привести к улучшению состояния структур сустава и снижению или полному отказу от применения НПВС.

Таким образом, исследование по применению аутологичных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток в лечении животных больных остеоартрозом является актуальным и перспективным.

3. Цель исследования.

Оценить эффективность и безопсаность применения аутологичных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани и стромально васкулярной фракции жировой ткани в лечении животных больных остеоартрозом.

4. Задачи исследования.

Провести интраартикулярную трансплантацию аутологичных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани и стромально васкулярной фракции жировой ткани животным больным остеоартрозом в полость пораженного сустава. Оценить безопсаность применения клеточных продуктов по наличию нежелательных реакций и явлений на всем периоде наблюдения за животным. Оценить эффективность применения трансплантации по результатам клинического обследования, лабораторных и инструментальных исследований.

5. Дизайн исследования.

Данное исследование является открытым и сравнительным. Животные в количестве 6 (шесть) будут разделены на две группы методом простой рандомизации, не зависимо от возраста, породы и пола. Группа 1 (три животных) будет получать интраартикулярную инъекцию аутологичных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани. Группа 2 (три животных) – интраартикулярную инъекцию стромально васкулярной фракции жировой ткани.

6. Алгоритм обследования.

Пациент, включенный в исследуемую группу, должен пройти следующее обследование.

  1. Сбор анамнеза:
    • Ф.И.О. владельца животного.
    • Вид, порода, пол, дата рождения, кличка животного.
    • Наличие перенесенных ранее заболеваний.
    • Наличие вакцинаций.
    • Продолжительность заболевания.
    • Основные клинические симптомы (начало хромоты, причина возникновения хромоты, провоцирующие факторы (отдых, нагрузка), сопутствующие факторы, острота заболевания, динамика хромоты).
    • Ответ на проводимую терапию, если на момент обращения лечение уже проводилось.
    • Общее самочувствие на момент обследования.
  2. Физикальное обследование:
    • Общий клинический осмотр с целью выявления симптомов поражения других органов.
    • Наблюдение за движением.
    • Пальпация.
    • Манипуляции с суставами.
    • Запись видеоролика походки.
  3. Лабораторные исследования:
    • Биохимический анализ крови.
    • Общий клинический анализ крови.
    • Общий клинический анализ мочи.
    • Клиническое исследование синовиальной жидкости.
    • Гистологическое исследование тканей сустава в случае случайной гибели.
  4. При проведении лабораторных исследований крови животное должно быть натощак. Пробы сдаются с 8 (восьми) часов утра до 12 (двенадцати) часов дня.

    При проведении лабораторных исследований мочи пробы собираются в первое утреннее мочеиспускание и в течение 2 (двух) часов доставляются в лабораторию.

  5. Инструментальные исследования:
    • Рентгенография пораженного сустава в 2 (двух) взаимно перпендикулярных проекциях.
    • Артроскопия пораженного сустава.

7. Критерии отбора:

  1. Критерии включения в исследование:
    • Животные всех возрастов, пород и полов.
    • Удовлетворительное или хорошее общее самочувствие.
    • Клинические признаки должны соответствовать диагнозу остеоартроз.
    • Рентгенографические признаки должны соответствовать диагнозу остеоартроз.
    • Артроскопические признаки должны соответствовать диагнозу остеоартроз.
    • Показатели биохимического анализа крови должны быть в пределах референсных значений (допускается незначительное отклонение показателей).
    • Показатели общего клинического анализа крови должны быть в пределах референсных значений (допускается незначительное отклонение показателей и выраженный относительный моноцитоз).
    • По результатам клинического исследования синовиальной жидкости должны регистрироваться помутнение, потемнение цвета, цитоз до 5*109 клеток/л, уровень синовиоцитов до 15% (допускается уровень всех показателей в пределах референсных значений).
  2. Критерии исключения из исследования:
    • Общее самочувствие средней тяжести или хуже.
    • Противопоказания к проведению общей анестезии.
    • Наличие любых злокачественных новообразований.
    • Наличие любых вирусных, бактериальных или грибковых заболеваний.
    • Участие в другом исследовании.

8. Этапы исследования.

Исследование включает следующие этапы:

  1. Этап клинического обследования перед проведением трансплантации.
  2. Продолжительность 7 (семь) дней.

    На данном этапе проводятся сбор анамнеза, физикальное обследование, необходимые лабораторные и инструментальные исследования, указанные в пункте 6 (шесть) настоящего протокола.

    Цель этапа клинического обследования перед проведением трансплантации: подтверждение диагноза, выявление органных дисфункций и оценка возможности включения пациента в группу исследования.

    Пациенты, удовлетворяющие критериям включения, принимаются в исследование при подписании протокола информированного согласия (Приложение №1).

  3. Этап получения биологического материала.
  4. Забор биологического материала будет выполнен по стандартной методике с соблюдением правил асептики и антисептики. Под местной анестезией проводится надрез кожи в области лопатки или брюшной стенки длиной 1,5-2 см. Затем небольшой кусок подкожного жира (до 2 см2) иссекается и помещается в стерильный контейнер, содержащий среду для транспортировки (DMEM 1000 mg D-glucose, 5% FBS, антибиотики). Также осуществляется забор венозной крови в стандартную биохимическую пробирку объемом 5 мл. Биоптат и пробирка с кровью помещаются в транспортный контейнер. Контейнер упаковывается, маркируется и доставляется в лабораторию. В лаборатории производится выделение ядросодержащих клеток путем ферментативной обработки биоматериала по стандартной методике.

    Далее для группы 1 проводится культивирование ядросодержащих клеток до необходимого количества по стандартной методике. После получения терапевтической дозы аликвота клеток помещается в криобанк для длительного хранения, а на основе остального количества готовится клеточный препарат. Для этого клеточная суспензия отмывается от культуральной среды, разводится в необходимом объеме физиологического раствора, помещается в шприц и стерильно упаковывается. Проводится анализ характеристик клеточного продукта: подсчитывается количество клеток (терапевтическая доза препарата составляет 3-8*107 клеток), определяется их жизнеспособность. Полученные данные вместе с общими сведениями о биоматериале и режимах культивирования заносятся в паспорт клеточного продукта, который передается в клинику вместе с препаратом.

    Для группы 2 сразу после выделения ядросодержащих клеток и удаления эритроцитов, адипоцитов и дебриса, производится подсчет клеток с определением их жизнеспособности. Аликвота клеточного продукта сохраняется в криобанке, а остальная часть ресуспендируется в растворе Хартмана, помещается в шприц, маркируется и стерильно упаковывается. Проводится анализ характеристик клеточного продукта: подсчитывается количество клеток (терапевтическая доза препарата составляет 3-8*107 клеток), определяется их жизнеспособность. Сведения о клеточном препарате заносятся в паспорт клеточного продукта и вместе с препаратом передаются в клинику.

  5. Этап трансплантации.
  6. После получения биоматериала проводится интраартикулярная трансплантация путем инъекции суспензии аутологичных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток в полость пораженного сустава. Через 1 (один) месяц после первой трансплантации при недостаточно выраженном клиническом эффекте проводится повторная трансплантация аналогичным способом.

  7. Этап оценки эффективности трансплантации.

    Эффективность проводимой терапии оценивается в течение 6 (шести) месяцев с момента первой трансплантации.

    Первичная оценка проводится через 1 (один) месяц после введения клеточной суспензии по результатам сбора анамнеза и результатам физикального обследования. При регистрации сохранения клинических признаков остеоартроза проводится повторная трансплантация и аналогичная оценка эффективности, спустя 1 (один) месяц.

    При регистрации стойкого снижения или исчезновения клинических признаков остеоартроза проводятся необходимые лабораторные и инструментальные исследования, указанные в пункте 6 (шесть) настоящего протокола.

    Для интерпретации результатов используются изменения клинической картины, лабораторных показателей и результатов инструментальных исследований.

    Клинический эффект:

    • Значительное снижение/исчезновение хромоты.
    • Значительное снижение/исчезновение боли при манипуляции с пораженным суставом.
    • Значительное снижение/исчезновение крепитации при манипуляции с пораженным.
    • Значительное снижение/исчезновение деформации конечности в области пораженного сустава.
    • Значительное снижение/исчезновение ограничения подвижности пораженного сустава при манипуляции.

    Оценка эффективности по результатам лабораторной диагностики:

    • Значительное снижение/нормализация относительного моноцитоза в крови.
    • Нормализация прозрачности и цвета синовиальной жидкости.
    • Значительное снижение/нормализация цитоза в синовиальной жидкости.
    • Значительное повышение/нормализация уровня синовиоцитов в синовиальной жидкости.

    Оценка эффективности по результатам инструментальной диагностики:

    • Значительное снижение/исчезновение признаков склероза субхондральной кости на рентгенограмме.
    • Нормализация/тенденция к нормализации контуров суставных поверхностей на рентгенограмме.
    • Исчезновение/уменьшение признаков неоднородности/минерализации хрящевой ткани на рентгенограмме.
    • Нормализация/тенденция к нормализации размера суставных пространств на рентгенограмме.
    • Нормализация/тенденция к нормализации взаиморасположения суставных структур на рентгенограмме.
    • Значительное снижение/исчезновение дистрофических изменений связочного аппарата, суставных поверхностей и синовиальной капсулы пораженного сустава по результатам проведения артроскопии.

9. Нежелательные явления.

Нежелательные явления - это любые патологические или непредусмотренные изменения в анатомических, физиологических или метаболических функциях, возникающие у пациента на этапе клеточной терапии.

Владелец пациента информирован о необходимости обращения к врачу в случае развития нежелательных явлений.

Нежелательные явления, которые наблюдались в ходе исследования, записывают в историю болезни пациента.

10. Сочетанная терапия.

Базовая терапия в полном объеме. Не допускается использование других методов клеточной терапии в ходе всего исследования.

11. Предшествующие и сопутствующие заболевания.

Любые заболевания, кроме основного, имеющиеся у пациента на момент подписания информированного согласия, рассматривают как сопутствующие заболевания, и записываются в историю болезни пациента.

Заболевания, развивающиеся или впервые выявленные у пациента во время исследования, а также ухудшение течения сопутствующих заболеваний рассматривают как нежелательные явления и регистрируют в историю болезни пациента.

12. Предшествующая и сопутствующая терапия.

Все лекарственные препараты, которые пациент принимает на момент включения в исследование или во время участия в исследовании, рассматривают как сопутствующую терапию и записывают в историю болезни пациента.

Применение сопутствующих препаратов во время исследования сведено до минимума. Тем не менее, если применение сопутствующих препаратов является необходимым для благополучия пациента, и эти препараты не влияют на эффективность трансплантации, то они могут быть назначены пациенту по решению исследователя и должны быть записаны в историю болезни пациента.

13. Прекращение лечения.

Лечение прекращается в следующих случаях:

  1. Значительное ухудшение общего самочувствия (самочувствие средней тяжести или хуже)
  2. Завершение исследования согласно протоколу

14. История болезни пациента.

Вся необходимая информация должна быть занесена в историю болезни пациента.

15. Клинические базы.

Ветеринарная клиника ООО «АВЕРС»

г. Москва, МКАД 73 км, дом 7 корпус 1.

тел. (495) 989-7747

aversvet.ru

zoo@aversvet.ru

наши новости
Все новости
Ветклиника АВЕРС входит в состав Национальной Ветеринарной Палаты